Laboratori de cultius cel·lulars
Aquest servei posa a disposició de la comunitat universitària i també d’altres institucions públiques i privades, la possibilitat de cultivar cèl·lules animals en règim d’autoservei o bé amb el suport del personal tècnic, i realitzar diferents tècniques que permetin el seu estudi i caracterització a nivell molecular i cel·lular.
Els laboratoris del servei estan diferenciats segons el tipus de cultiu amb el qual es treballi:
- Laboratoris de Cultius Primaris: Destinats al treball amb cultius primaris, obtinguts de teixits provinents majoritàriament de murins criats en un estabulari per aquesta finalitat o bé obtinguts de mostres clíniques humanes.
- Laboratoris de Línies Cel·lulars: Destinats al treball amb línies cel·lulars estables, lliures de micoplasma.
Per al treball en cultius cel·lulars es requereixen una sèrie de condicions d’asèpsia, i per a garantir-les, els tècnics del servei realitzen les següents tasques:
- Manteniment general dels laboratoris (neteja i desinfecció dels aparells, retirada de residus, reposició de desinfectants...)
- Control del bon funcionament i manteniment preventiu dels aparells dels laboratoris (incubadors, cabines, banys, centrífugues, microscopis,...).
- Validació anual de les cabines de cultius.
- Revisió i neteja anual dels microscopis.
- Elaboració de protocols de neteja i manteniment.
- Elaboració de protocols i registres de l’ús dels diversos aparells.
Amb la finalitat de minimitzar les alteracions genètiques en les línies cel·lulars establertes, així com evitar la senescència i la transformació de cultius primaris o, simplement, la pèrdua accidental d’un cultiu cel·lular per mort o contaminació, és imprescindible recórrer a mètodes d’emmagatzematge adequats. Actualment el millor mètode de conservació cel·lular és la congelació en nitrogen líquid.
Aquest servei compta amb una zona de crioconservació amb diferents criocongeladors gestionats pels tècnics del servei, que s’encarreguen de:
- Control de l’ús de la instal·lació de Nitrogen líquid de l’Institut
- Manteniment i reompliment de nitrogen líquid
- Gestió de l’estoc de cèl·lules del servei
- Manteniment de la documentació preceptiva
- Elaboració de normes d’ús de la instal·lació
- Control de la facturació als usuaris
Els laboratoris es poden usar en règim d’autoservei, però com el servei de cultius cel·lulars compta amb personal tècnic qualificat i especialitzat en tècniques de laboratori per al treball en cultius cel·lulars, i sabent la necessitat en la que es troben alguns grups d’investigació per la manca de personal tècnic, el servei ofereix als usuaris la realització de tasques específiques per part dels seus tècnics:
- Preparació de medis de cultiu, tampons, etc.
- Tècniques bàsiques de cultiu cel·lular
- Manteniment i congelació de línies
- Obtenció i aïllament de cultius primaris
- Infecció i transfecció de línies cel·lulars
- Altres tasques de suport en cultius cel·lulars
- Realització del test de micoplasma
El Servei de Cultius Cel·lulars (SCT-CC) de la UdL adopta una estratègia experimental àmpliament utilitzada en el camp clínic i en la investigació bàsica. Permet abordar l'estudi de diversos processos, com ara l'activitat i el flux intracel·lular, l'ecologia cel·lular i les seves interaccions, a través de tècniques que constitueixen una eina imprescindible per a l’actual recerca bàsica i clínica dins de l’àmbit de la biologia cel·lular i molecular.
A l’actualitat poden cultivar-se al laboratori cèl·lules procedents d’una àmplia gamma de teixits i organismes diferents.
Els cultius de cèl·lules animals tenen aplicació, com a tècniques úniques o complementàries d’altres, en un gran nombre de línies d’investigació i han estat cabdals en nombrosos avenços científics assolits en diferents branques de les ciències biomèdiques.
Per exemple, les tècniques de cultiu cel·lular permeten l’estudi de les funcions cel·lulars: metabolisme, control del cicle cel·lular, modulació de l’expressió gènica, etc...; així com l’estudi de nombrosos aspectes relacionats amb diferents models de malalties, infeccioses o no.
Una altra àrea de gran interès es centra en la biologia del desenvolupament, mitjançant la recerca de models experimentals que permetin explicar com el gran nombre de cèl·lules presents en l’organisme madur deriven d’una sola cèl·lula a partir de la fertilització. Per això les línies cel·lulars que conserven la capacitat de diferenciar-se in vitro son objecte d’un intens estudi.
Nombroses investigacions no poden realitzar-se sense el cultiu de cèl·lules. Per exemple, la creació d’animals transgènics es basa totalment en les tècniques de cultiu cel·lular, per a la inserció de gens foranis a les cèl·lules receptores. Així com també la reproducció assistida in-vitro.
També s’han desenvolupat diverses aplicacions per a la investigació en biologia cel·lular, bioquímica, farmacologia o toxicologia: la indústria farmacèutica utilitza aquestes tècniques en els estudis per al desenvolupament de nous fàrmacs. A més, s’han desenvolupat processos industrials per a l’obtenció d’anticossos i hormones i tècniques per al diagnòstic prenatal de diferents malalties, entre d’altres.
A l’actualitat el Servei compta amb el següent equipament:
Flux laminar vertical: per tal d’evitar la contaminació del producte a la zona de treball i assegurar la protecció de l’usuari.
- 7 Cabines model AV-100 de TELSTAR
http://www.telstar-lifesciences.com/files/BR-AV100-30-70-EN-1306.pdf
- 2 Cabines model BV-100 de Burdinola
- 1 Cabina model PV-100 de Burdinola
Flux laminar horitzontal: proporcionen la màxima seguretat al producte.
- 1 Cabina model AH-100 de Telstar
http://www.telstar-lifesciences.com/files/BR-H100-ES-0408.pdf
- 1 Cabina model Mini-H de Telstar
http://www.telstar-lifesciences.com/files/BR-MINIH-ES-0508_0.pdf
Cabines de seguretat biològica tipus II: garantitzen l’absència de contaminació del producte a la zona de treball i la més alta protecció de l’operador i el medi ambient.Nivell de contenció 2.
- 4 Cabines model Bio-II-A de Telstar
http://www.cosela.es/imagenes/galeria/0.46811900%201317631422.pdf
Tancs amb nitrogen líquid per al manteniment de les cèl·lules: garantitzen la correcta conservació i posterior viabilitat de les cèl·lules emmagatzemades durant llargs períodes de temps.
- 1 Tanc model Arpège 170 de Air Liquide
http://www.airliquide.at/loesungen/business/labor-analytik/docs/la_arpege.pdf
- 1 Tanc model Arpège 110 de Air Liquide
http://www.airliquide.at/loesungen/business/labor-analytik/docs/la_arpege.pdf
- 1 Tanc model Arpège GT-40 de Air Liquide
http://www.airliquide.at/loesungen/business/labor-analytik/docs/la_arpege.pdf
Tancs de càrrega de nitrogen líquid:
- 1 Tanc model LD-50 de VWR
Incubadors de CO2 amb sensor d’infrarojos i camisa d’aigua, que es complementa amb una instal·lació centralitzada de CO2 que assegura el subministrament constant i automatitzat.
- 11 incubadors model 3121 de Thermo Forma
https://tools.thermofisher.com/content/sfs/brochures/D13134~.pdf
- 2 incubadors model 4121 de Thermo Forma amb pantalla tàctil
https://tools.thermofisher.com/content/sfs/brochures/DS-CO2%20FORMA3.pdf
Centrífugues de sobretaula amb rotor basculant i adaptadors per a tubs i plaques:
Refrigerades:
- 1 Centrífuga model Allegra X-15-R de Beckman Coulter
- 1 Centrífuga model 5810R de Eppendorf
http://www.uvic.ca/medsci/assets/docs/research-facilities/centrifuge-eppendorf-5810r-manual.pdf
No refrigerades:
- 1 Centrífuga model 5804 de Eppendorf
http://www.uvic.ca/medsci/assets/docs/research-facilities/centrifuge-eppendorf-5810r-manual.pdf
- 1 Centrífuga model 5100 de Kubota
Microscopis invertits de contrast de fases:
- 2 Microscopis model CKX41 de Olympus
http://www.instrumentalpasteur.com.ar/descargas/olympus_ckx41-31.pdf
- 1 Microscopi model CKX31 de Olympus
http://www.instrumentalpasteur.com.ar/descargas/olympus_ckx41-31.pdf
Microscopis invertits de contrast de fases i fluorescència:
- 1 Microscopi model DM IRB de Leica
- 1 Microscopi model CKX41 de Olympus
http://www.instrumentalpasteur.com.ar/descargas/olympus_ckx41-31.pdf
- 1 Microscopi model IX51 de Olympus amb sistema de captació d’imatges d’alta qualitat connectat a un ordinador amb un software adequat.
https://www.ucc.ie/en/media/academic/anatomy/imagingcentre/icdocuments/OLYMPUSIX71_manual.pdf
- 1 Microscopi model IX70 de Olympus amb sistema de captació d’imatges d’alta qualitat connectat a un ordinador amb un software adequat.
- 1 Microscopi model IX71 de Olympus amb sistema de captació d’imatges d’alta qualitat connectat a un ordinador amb un software adequat.
https://www.ucc.ie/en/media/academic/anatomy/imagingcentre/icdocuments/OLYMPUSIX71_manual.pdf
- 1 Microscopi model EVOS FL de Life Technologies amb il·luminació LED i sistema de microscòpia compacta amb hardware i software incorporats.
https://www.emsdiasum.com/microscopy/technical/manuals/EVOS_FL.pdf
Lupes binoculars:
- 1 Estereomicroscopi model SZ60 de Olympus
http://www.alanwood.net/downloads/olympus-sz30-sz40-sz60-sz11-brochure.pdf
- 1 Estereomicroscopi model SZ61 de Olympus
http://www.olympusamerica.com/files/seg_bio/sz61_51-brochure-2012-mar.pdf
- 1 Estereomicroscopi model SZ-STB1 de Olympus
http://www.alanwood.net/downloads/olympus-sz30-sz40-sz60-sz11-brochure.pdf
- 1 Estereomicroscopi model S4E de Leica
Lupes trioculars:
- 1 Estereomicroscopi model SZ-STB1/SZ40/SZ-PT de Olympus
http://www.alanwood.net/downloads/olympus-sz30-sz40-sz60-sz11-brochure.pdf
- 1 Estereomicroscopi model S6D de Leica que es pot connectar a la càmera del microscopi de fluorescència Olympus IX70 per a la captació de imatges
- 1 Estereomicroscopi model SZ61 de Olympus
http://www.olympusamerica.com/files/seg_bio/sz61_51-brochure-2012-mar.pdf
Lupes de fluorescència:
- 1 Estereomicroscopi de fluorescència model SMZ18 de Nikon amb sistema de captació d’imatges d’alta qualitat connectat a un ordinador amb un software adequat.
Equipament necessari per al treball en cultius cel·lulars que proporciona el servei per a ús dels seus usuaris:
- 7 Banys termostàtics
- 5 Agitadors tipus vòrtex
- Sistema centralitzat de buit a l’edifici
- 1 Nevera Miele (4 ºC y -20 ºC) que garantitza l’adequat emmagatzematge dels reactius i solucions
Al laboratori de cultius cel·lulars només hi entrarà el personal autoritzat.
El primer dia els nous usuaris ompliran una fitxa amb les seves dades i el personal del servei els hi farà una presentació dels laboratoris i explicació de les directrius de funcionament.
El principal objectiu d’aquesta presentació és que coneguin el funcionament del servei, el seu personal i les normes de laboratori per a manipular cultius cel·lulars i poder treballar a les nostres instal·lacions en la modalitat d’autoservei.
En el següent document trobareu la normativa interna per a l’ús dels laboratoris de cultius:
DOC-CC-02: Directrius de funcionament dels laboratoris (PDF)
Directora del Servei
Tècnica de Suport a la Recerca
Documents d'interès
Reglament Intern (CAT) / Reglamento Interno (CAST) / Rules of Procedure (ENG)
Directrius de funcionament dels laboratoris (CAT) / Directrices de funcionamiento de los laboratorios (CAST) / Guidelines for cell culture laboratories (ENG)
Directrius de funcionament a la sala 3.16 per a la manipulació de mostres biològiques derivades de pacients (CAT) / Directrices de funcionamiento de la sala 3.16 para la manipulación de muestras biológicas derivadas de pacientes (CAST)